非洲豬瘟檢測(cè)儀現(xiàn)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)步驟及樣品前處理：CSY-E96D非洲豬瘟檢測(cè)儀可快速畜牧類(lèi)疾病診斷如非洲豬瘟、禽流感、豬瘟、豬藍(lán)耳、偽狂犬等疾病，廣泛應(yīng)用于養(yǎng)殖場(chǎng)、屠宰場(chǎng)、肉產(chǎn)品深加工企業(yè)、檢驗(yàn)檢疫單位使用。

2007年以來(lái)，非洲豬瘟在全球多個(gè)國(guó)家發(fā)生、擴(kuò)散、流行，特別是俄羅斯及其周邊地區(qū)。2017年3月，俄羅斯遠(yuǎn)東地區(qū)伊爾庫(kù)茨克州發(fā)生非洲豬瘟疫情，疫情發(fā)生地距離我國(guó)較近，僅為1000km左右；另外，我國(guó)是養(yǎng)豬及豬肉消費(fèi)大國(guó)，生豬出欄量、存欄量以及豬肉消費(fèi)量均位于全球首位，每年種豬及豬肉制品進(jìn)口總量巨大，與多個(gè)國(guó)家貿(mào)易頻繁；而且，我國(guó)與其它國(guó)家的旅客往來(lái)頻繁，旅客攜帶的商品數(shù)量多、種類(lèi)雜。因此，非洲豬瘟傳入我國(guó)的風(fēng)險(xiǎn)日益加大，一旦傳入，其帶來(lái)的直接以及間接損失將不可估量。對(duì)此，2017 年 4 月 12 日，我國(guó)農(nóng)業(yè)部發(fā)布了關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)非洲豬瘟風(fēng)險(xiǎn)防范工作的緊急通知

非洲豬瘟檢測(cè)儀現(xiàn)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)步驟及樣品前處理準(zhǔn)備工作：

1.請(qǐng)?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。

2.從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正常現(xiàn)象；放置室溫，輕搖均勻，待結(jié)晶完全溶解后再配置洗滌液。可將20ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液，未用完的放回4℃

3.20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1：20稀釋?zhuān)?份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

非洲豬瘟檢測(cè)儀實(shí)驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材：

1.檢測(cè)儀（450nm）

2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫箱或水浴鍋

4.蒸餾水或去離子水

非洲豬瘟檢測(cè)儀樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

2. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

3. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

4.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

5.不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

非洲豬瘟檢測(cè)儀操作步驟：

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔，陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照各50μL；

3.待測(cè)樣本孔加待測(cè)樣本10μL，樣本稀釋液40μL；

4.隨后陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗原100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光水浴鍋孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在非洲豬瘟檢測(cè)儀450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。